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          离心机的操作方法

          2021-8-27 12:27:49 点击数:

          接下来介绍一种采用本法所提染色体DNA,可直接应用于常规的分子生物学实验,包括PCR、限制性内切酶的切割,以及基因组文库的构建。其中,有个关键性实验设备——离心机,少了它可不行。

            1、 取1ml过夜培养菌液于8000g,离心机离心2min。去除培养基后,用400ul STE缓冲液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重悬菌体,按相同条件离心清洗菌体两次。

            2、 收集的菌体用200ul TE缓冲液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)悬起后加约50mg 直径425-600um 规格的玻璃珠,再加入100ul Tirs饱和苯酚。

            3、 上述混合液在漩涡振荡器上振荡(细菌,振荡60s;酵母,振荡120s-200s),随后于4℃,13000g,离心5min。

            4、 吸取上层水相(约160ul)转移至一个新的离心管中,加TE缓冲液补至200ul,再加入100ul氯仿混匀后,于4℃,13000g,离心5min。重复此步两到三次。

            5、 转移上层水相(约160ul)至一个新的离心管中,补加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。

            6、 加入100ul 氯仿混匀于4℃,13000g,离心机离心5min。

            7、 转移上层水相(约150ul)至一个新的离心管中。




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